镍柱堵了或出现棕色的情况，纯化过程中蛋白出现了浑浊？

　

 镍柱堵了怎么办？

（1）柱子发生堵塞，可能是样品中细胞碎片或其他杂颗粒所致，所以样品一定要高速离心。
（2）上清纯化时，蛋白发生变性，有絮状物产生，赶紧加入 1-2mM DTT （上清样品处理要在冰浴中进行），还不行加尿素变性，使其在变形环境下。
（3）样品处理时的料液比不要太小，否则黏度大，或者导致蛋白析出或变性，料液比要在 1/10-1/15 之间较适宜。

镍柱使用中出现棕色是怎么回事?

出现这样的情况，主要是缓冲液中 DTT 的影响，DTT 会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响，在碱性的缓冲液条件下镍离子会被 DTT 还原生成棕色的沉淀，所以所有镍柱的生产商都强调要尽量避免 DTT 的参与（一般的镍柱耐受小于 5mM DTT，推荐缓冲液中不要超 2mM DTT）。

纯化过程中，蛋白出现了浑浊，怎么办？

（1）出现浑浊，说明蛋白处在不稳定的环境中或者自身就不稳定，所以要检查缓冲体系是否正确，环境是否低温，或在缓冲液中加入还原剂 DTT。
（2）加入肌氨酸钠，迅速使蛋白变性，消除浑浊现象。

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