通过 His 标签纯化的蛋白，杂带比较多？
（1）如果纯化的是上清，蛋白酶会部分降解目的蛋白，可通过加多种蛋白酶抑制剂改进。
（2）可提高杂蛋白与镍柱结合起始咪唑浓度，以降低杂蛋白与镍柱的亲和力。
（3）杂蛋白和目的蛋白结合，可通过超声前加入去垢剂的方式消除（1%-2%Tritonx-100）。
没能纯化到带 His 标签的蛋白，蛋白都流穿了（未挂柱）？
（1）超声的功率不对（太大，蛋白炭化，太小，蛋白没有释放） ；
策略：改变超声功率，并在超声前加入溶菌酶。
（2）样品或者是结合缓冲液不正确 ；
策略：检测 pH 及样品和结合缓冲液的组成份（EDTA）。
（3）组氨酸的标签没有完全的暴露 ；
策略：在变性条件下（用 8M 脲，6M 盐酸胍，1%SDS） 并加入 1-2mMDTT 进行纯化。
（4）His 标签丢失；
策略 1：WB 或者 anti-his 的抗体检查 His 是否表达，上游构建，改变 his-tag 的位（C-terminal orN-terminal），必要时增加 his 个数（常用 6-10 个）；
策略 2：孵育的时间不够，降低流速和增加孵育的时间；
策略 3：改变螯合的金属离子，寻找到最佳的结合金属离子。
Ni2+通常是从宿主细胞蛋白中纯化大多数（组氨酸）6 标记的
重组蛋白质的首选金属离子，也是一般最常用的离子。
蛋白和金属离子之间的结合强度受几种因素影响，包括长度、位置、亲和标记在蛋白的暴露程度、所用离子的类型、以及缓冲液的 pH，因此一些蛋白用其他离子可能更容易地进行纯化而不用 Ni2+。可以利用 Hitrap IMACHP 来筛选不同的金属离子。
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