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倍肯重组蛋白A/G
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重组蛋白G预装柱(rec-Protein G Column)

重组蛋白G预装柱(rec-Protein G Column)

产品时间:2020-06-19 17:52

更多: 重组蛋白

简要描述:

本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A、蛋白G、蛋白A/G,产品最终纯化效率较普通偶联有...

仪器介绍

重组蛋白G预装柱规格

产品编号:GD G001-1mL;  GD G001-2mL; GD G001-5mL;GD G001-50mL;GD G001-150mL;
生产批次:见产品标签
有效期:4℃长期存放,有效期三年

重组蛋白G简介

产品形式

本产品通过现代基因工程重组技术,将蛋白G基因在大肠杆菌中高效表达,可溶性表达产物经亲和层析纯化后共价偶联于填料上。产品按批次质控后、依照国际上常用保存方式,保存于20%乙醇中待用。
r<a href='http://www.gzbeiken.com/syyq/czdb/bkczdb/2020/0619/223.html' target='_blank'><u>Protein G</u></a>rProtein G

产品简介

天然蛋白A或蛋白G、蛋白A/G 可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。本填料使用的重组rec-Protein A 或rec-Protein G、rec-Protein A/G是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A或rec-Protein G、rec-Protein A/G去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点,特异性更好。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A、蛋白G、蛋白A/G,产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

产品技术指标

rec-Protein G/Sepharose 比值:
35-40mg rec-Protein G/ml Sepharose
结合能力:
45-58mg人IgG / ml填料(上样1次)
40-44mg兔IgG / ml填料(上样1次)
4.5-15mg鼠血清IgG/ml填料
5-15mg鼠腹水IgG/ml填料
rec-Protein G分子量:22.5 KDa
每分子rec-Protein G可结合IgG位点数:
2个
每分子rec-Protein G可结合白蛋白位点数:

线性流速:
100-150 cm/h
耐压指数:
0.008 MPa

产品保存

产品储存于2-8℃

rec-Protein G-Sepharose预装柱纯化IgG抗体步骤

以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rec-Protein G的结合能力不同,具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rec-Protein G-Sepharose装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.0),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 加入5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0),再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。
7. 向层析柱加入10倍柱体积20% Ethanol,于4~8 ℃冰箱保

表1 Immunoglobulin Reactivity with Protein A & Protein G

IgG类型 Protein A Protein G IgG类型 Protein A Protein G
人 IgG1 ++++ ++++ 大鼠 IgG2b - ++
人 IgG2 ++++ ++++ 大鼠 IgG2c + ++
人IgG3 - ++++ 大鼠 IgM +/- -
人IgG4 ++++ ++++ 兔 Ig ++++ +++
人IgA ++ - 鸡 Ig - +
人n IgD ++ - 仓鼠 Ig + ++
人IgE ++ - 豚鼠 Ig ++++ ++
人 IgM ++ - 牛 Ig ++ ++++
小鼠 IgG1 + ++++ ++ ++++
小鼠 IgG2a ++++ ++++ 奶牛 ++ ++++
小鼠 IgG2b +++ +++ +++ +++
小鼠 IgG3 ++ +++ 绵羊 +/- ++
小鼠 IgM +/- - 山羊 - ++
大鼠 IgG1 - +      
大鼠 IgG2a - ++++      


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